层粘连蛋白是组成细胞外基质(ECM)的糖蛋白,参与细胞粘附、迁移和增殖等。此外,层粘连蛋白和Ⅳ型胶原蛋白等被认为是基底膜(Basement membrane)的主要组成成分。FUJIFILM Wako可提供多重染色用的豚鼠抗层粘连蛋白抗体。

层粘连蛋白(Laminin)是一种分子量约为900 kDa的糖蛋白,由α、β和γ三个糖链聚集在一起形成十字结构。α链、β链和γ链分别存在多个分子种类,层粘连蛋白的类型根据其组合方式来命名(例如,α1、β1和γ1组成的层粘连蛋白称为层粘连蛋白-111)。

层粘连蛋白是众所周知的细胞外基质 (ECM) ,已知参与细胞粘附、迁移和增殖。特别是,层粘连蛋白和IV型胶原蛋白被认为是基底膜的主要成分。

在中枢神经系中,层粘连蛋白几乎只在血管周边的基底膜中表达,被用作血管的标志物。既往的研究显示,脑血管基底膜内层(内皮侧)含有层粘连蛋白-411和-511,而外层(脑实质侧)含有层粘连蛋白-211和-1111),参与血脑屏障(BBB: Blood-Brain Barrier)的形成与功能。

“抗层粘连蛋白,豚鼠”是豚鼠来源的层粘连蛋白多克隆抗体,可用于免疫组织染色中的多重染色2-6)

 

层粘连蛋白的基本构造

根据文献1)绘制

参考文献

1. Halder, S. K. et al.: Neural Regen. Res., 18(12), 2557(2023).

2. Morita, S. et al.Cell Tissue Res., 363, 497(2016).

3. Nishikawa, K. et al.: J. Neuroendocrinol., 29(2), (2017).

4. Takagi, S. et al.: J. Neuroimmunol., 331, 74(2019).

5. Muneoka, S. et al.: J. Neuroimmunol., 331, 58(2019).

6. Murayama, S. et al.: J. Neuroimmunol.334, 576973(2019).

抗体信息

抗体种类

多克隆抗体

抗原

从Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤的基底膜中分离的层粘连蛋白

免疫动物

豚鼠

组成

使用PBS稀释抗血清

标记

未标记

交叉性

小鼠、大鼠

应用

免疫组织化学染色(冰冻切片)1:500

(※ 推荐后固定时间为6h)

Protocol(示例)

01

灌注固定:使用0.1%柠檬酸钠/PBS灌注除血后,4% PFA灌注

02

后固定:4% PFA (推荐6 h)

03

蔗糖替换:30%蔗糖/PBS(4℃,过夜~约2天)

04

制备冰冻切片:去除蔗糖后,制备冰冻包埋块,并用低温切片机制备30 μm厚的切片

05

甘氨酸处理:25 mM甘氨酸PBS(20 min左右)

06

封闭:5% 正常山羊血清,0.3% Triton X-100/PBS(4℃,过夜)

07

一抗:抗层粘连蛋白, 豚鼠(1︰500),1% 正常山羊血清,0.3% TritonX-100/PBS(4℃,过夜~2 天)

08

清洗:0.3% TritonX-100/PBS(5 min×3次)

09

二抗:Alexa Fluor® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L) (1:500) (产品编号:568-77901),1% 正常山羊血清,0.3% TritonX-100/PBS(室温,2 h)

10

清洗:0.3% TritonX-100/PBS (5 min×3次)

11

封装:4℃下避光存储

性能数据

物种:小鼠

部位:海马体

样品:冰冻切片

抗体浓度:1:500

数据提供:京都工艺纤维大学 应用生物学系 宮田老师

物种:小鼠

部位:延髓最后区

样品:冰冻切片

抗体浓度:1:500

数据提供:京都工艺纤维大学 应用生物学系 宮田老师

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