残留DNA提取试剂盒遵照中国药典记载的碘化钠法,适用于疫苗和治疗用生物制品所含宿主细胞残余DNA的提取。
残留DNA提取试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA,回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90 min。提取的DNA可以通过qPCR进行定量。
● 高回收率回收微量DNA(100-1,000 fg)
● 回收后的DNA可通过qPCR、Threshold Assay(Molecular Devices)进行定量
1. 使样品中的蛋白质和脂质溶于碘化钠和月桂酰肌氨酸钠;
DNA Extractor™ Kit可以高产量提取残留DNA,甚至少量残留DNA。
使用不同浓度的IgG溶液检测CHO来源DNA的加标回收率。
1)向不同浓度的IgG溶液(10-100 mg/mL)中添加2 pg/mL CHO来源DNA。
● 样品前处理:蛋白浓度超过2 mg/mL时实施的前处理方案(Proteinase K处理)
3)通过qPCR法计算提取的CHO来源DNA的回收率。
结果显示,即使蛋白浓度高达100 mg/mL,也能高回收率提取CHO来源DNA。
检测抗体药物常用的Buffer及添加剂制备的IgG溶液中的 CHO来源DNA的加标回收率。
1)向抗体药物中常用的Buffer组成(表1.①-⑥)及添加剂溶液中添加20 mg/mL的IgG蛋白,制备不同的抗体药物模拟溶液。向不同溶液中添加 20 pg/mL CHO来源DNA。
● 样品前处理:蛋白浓度超过2 mg/mL时实施的前处理方案(Proteinase K处理)
3)通过qPCR法计算提取的CHO来源DNA的回收率。
Buffer: 10 mM PB pH 6.0, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA
结果显示,即使含有不同Buffer组成和添加剂的IgG溶液也能高回收率提取CHO来源DNA。